目前，单细胞测序技术已经成为了科学家解锁生命奥秘的利器，广泛应用于肿瘤，免疫，神经，发育生物学以及药物研发，临床转化等研究领域。但是以往的单细胞测序，必须在拿到组织样本后立马进行单细胞悬液的制备并且及时进行上机捕获，为此，也给研究人员造成了很多困扰。曾经你也做过如下的梦吧：

今天小编可以大声的告诉您，10x Genomics推出的Single Cell Fixed RNA Profiling Kit可以让您的梦想成真啦！通过对单细胞/细胞核悬液进行固定，可以固定细胞内RNA的状态，并且可以进行较长时间的保存和长距离运输，您可以将多批次的样本攒到一起进行一次上机，并且还可以进行混样上机，一次分析数十万个固定的的单细胞/细胞核数据，降低实验成本！接下来就让小编为您具体介绍一下这款产品吧。

Fixed RNA Profiling工作流程

首先用4%的多聚甲醛（PFA）对制备好的单细胞/单细胞核悬液进行固定，然后将每个样本的细胞内RNA与探针进行杂交，探针上会有一段barcode序列，在数据分析时，用于区分样本来源，杂交好的细胞样本就可以进行混样了，一个孔最多可以混16个样本，捕获到12.8万个细胞，通过Chromium X/iX进行单细胞捕获，接着文库构建和数据分析。

Fixed RNA Profiling混样原理

由于细胞样本经过固定，所以10x不再用捕获mRNA Ploy-A尾的方式进行单细胞mRNA的捕获，而是针对人和小鼠，设置了18000个基因的探针对，一共设置了55000种探针对，一般每个基因包含三个探针对，而对于一些表达丰度特别高的基因设计了一个探针对。探针对的结构如下图所示，探针和mRNA杂交后，探针对会连接起来，Probe Barcode用去区分样本，pCS1可以与10x Gel Beads上的Oligo序列进行连接。因为每一个细胞里的RNA都杂交上了探针对，里面含有Probe Barcode，所以后续我们通过捕获探针对进行数据区分，这样即使混样的话，也可以把不同的样本数据很好的拆分出来。

Fixed RNA Profiling数据表现

①单细胞固定保存不同时长，数据稳定性很好

10x Genomics内测了人类PBMC单细胞样本在固定0天，4 保存一周，-80 保存一个月的数据效果，从下图可以看出，三组数据在细胞类型占比及片段mapping率上具有很高的一致性。

②针对不同样本类型，Fixed RNA Profiling数据具有很高的一致性

10x 内测了不同的细胞类型（包括PBMC，Jurkat,Raji，Bladder DTC,Kidney DTC），并设置了保存0天，3天，7天，一个月四个梯度，数据显示，固定后的细胞，在基因中位数和片段比对率上具有很高的一致性。

③Fixed RNA Profiling可以兼容细胞表面蛋白检测

利用10x 的Feature Bacorde,可以实现固定样本的RNA和细胞表面蛋白质的共检测。如下图所示。

④利用Fixed RNA Profiling进行混样，混样数据质量不会受到明显影响

10x 内测了采用Fixed RNA Profiling的方法不混样，混4个样，混16个样的数据，如下图所示，数据质量没有明显的变化，且数据具有很好的均一性。

⑤与10x的单细胞3端V3.1试剂相比，二者具有良好的数据一致性

10x 内测了不同的样本类型3端V3.1试剂与Fixed RNA Profiling试剂的对比，数据结果显示，在每个细胞的基因检出中位数上，Fixed RNA Profiling试剂具有更高的灵敏度，这也与探针捕获的方式有很大的关系。

Fixed RNA Profiling的优势

•在采集点固定人类或小鼠的新鲜/冰冻/石蜡组织样本，以锁定其生物学状态，并保留脆弱细胞

•改进样本采集、制备和处理步骤，以简化单细胞工作流程

•通过样本的批量处理和混样分析，减少实验可变性并提高效率

•同时对基因表达和细胞表面蛋白进行高度灵敏地测定（可兼容细胞表面蛋白检测）

•一个孔可以最多混16个样本，得到12.8万个细胞，大大降低实验成本

Fixed RNA Profiling送样条件

如果您需要自己固定，我们也可以为您提供Fixed RNA Profiling 实验方案以及Fixed RNA Profiling kit，支持在短期(4 C / 7天)和长期(-20/-80 C, >1月)条件下保存和运输。

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