浴冰重生：来自一个标本的自白

传说，

凤凰是人世间幸福的使者。

每五百年，

它就要背负着

积累于人世间的所有不快和仇恨恩怨，

投身于熊熊烈火中自焚，

以生命的美丽终结

换取人世的祥和与幸福。

在肉体经受了巨大的痛苦和轮回后

它们才能以更美好的躯体重生。

然而，

我不是凤凰。

我只是一个标本。

我的主人正被痛苦的癌症折磨，

为了减轻她的疼痛，

我必须牺牲自己。

烈火，

或冰冻，

总要选择一种死的方式。

烈火让你灰飞烟灭，

冰冻却能让我活成永恒，

美其名曰“重生”。

然而

听医生说，

即使是冰冻，

死的方法也有很多种。

最快捷、简便的要数冰冻切片了，

它还可以用于手术中的快速病理诊断。

1

干脆一点的比如直接冰冻切片法多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片，如恒冷箱切片、甲醇制冷器制冷箱切片、二氧化碳冰冻法切片、半导体制冷冰冻切片等。

2

如果标本很脆弱或者有树枝状突起（当切片后投入水中时，常常引起分散，甚至发生丢失；如果间隙较多，还会因发生散乱而失去相互间的联系造成移位）则可以尝试明胶冰冻切片法。

3

或者选择冰冻切片粘片法三种中的任一种。

3.1蛋白甘油粘片法

烘烤的温度不超过40 ，

待烤干后立即取出，

因为时间过久或温度过高切片都容易破碎。

烤干后用70%乙醇及蒸馏水洗后即可染色。

3.2Lillie明胶粘片法

则是将切片放入1%明胶水溶液数分钟，

捞出置于载玻片上，

将多余液体倾去。

入环保组织固定液中

固定5 min,水洗10 min，即可染色。

3.3乙醇明胶粘片法

则需将切片浸入

0.1%或0.75%明胶溶液

（以40%乙醇配制）

数分钟，

捞于载片上，

经室温短时干燥，

入氯仿1 min ，

经95%及70%乙醇洗去氯仿，

再经蒸馏水洗后染色。

他们又说

现在国内外有许多厂家

用高分子材料

配制成了冰冻切片包埋液，

可直接在切片机组织卡盘（chuck）上

加少许包埋液，

在其固化前将标本嵌入，

然后周围加入少许包埋液稳定。

常规切片厚度为2-100微米。

或者

在盛标本的包埋模具内，

挤出适量冰冻包埋液，

将标本放入后再加包埋剂完全淹没，

如有气泡则用针头或吸头吸出。

然后将装有标本和包埋液的模具，

正置于切片机冷室内冰冻10分钟，

至包埋液固化。

也可将模具置于液氮或-40 -70 度冰箱冰冻固化保存。

突然觉得，

原来死也是一件极其麻烦的事情。

正当我犹豫不决的时候，

很多已经重生的小伙伴，

走到我身边，

给我说了它们自己的故事。

原来

小A的出现是因为在手术进行中，医生突然发现它主人的病变与原诊断和原定手术方案不相符合；

小B的使命是为了了解淋巴结内是否有转移的淋巴细胞或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者采取其他的治疗措施；

小C需要帮一个恶性肿瘤患者了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织；

小D诞生于一个病人在做剖腹探查时发现的肿块；

小E给我展示了它身上的的脂肪和脂类物质，它们来源于脂肪瘤、肉瘤或某些科研组织等；

小F身上，有一些酶，比如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。

小G身上特殊的染色效果，据说是用Eager氏法 和Marchi氏法获得的。

听完了大家的诉说，

我坚定了自己成为冰冻切片的决心，

便毫不犹豫地推开了白衣天使的门。

他们马上召集了

冰冻切片领域的专家，

召开了一个座谈会。

院长首先发话：

“为了让顾客更好地了解我们要做的事，

现在请各部门负责人阐述一下手术过程。”

“第一步，是取材。”

A:“取材的时候我们会尽量保持刀具与台面的干燥，避免标本与水接触，即使标本中含有水或者血性液体，我们也会用干燥的纱布或者滤纸把水吸干，这样可以提高切片的质量从而防止空洞、冰晶等现象的出现。”

B:“由于脂肪组织不易于切片，我们在取材时会尽量去除。”

C:“取材时也会注意标本结构的完整性，会带有背膜、皮质、髓质或者内膜等结构。”

D:“此外，还会考虑标本结构的方向性以及标本切片的方向性，如肾标本的取材，标本的截面会包括肾背膜、肾皮质、肾髓质3种结构。若您没有立刻切片的要求，我们则可以先清理然后快速放入液氮保存。”

A:“取材后会对标本进行包埋、切片、固定等前期处理。”

“快速冷冻可以有效降低冰晶的形成。新鲜的组织要快速冷冻，一般情况下，较硬组织如子宫肌瘤要冷冻1-2分钟，软组织以及细胞丰富的组织如肝、脾和淋巴结等需要2-4分钟，脂肪组织需要5-6分钟，脂肪组织的切片厚度要达到8-10 um才更有利于观察。”

“现常用的冰冻包埋液是由高分子聚合物组成的透明粘稠液体，速冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近，因此能保证最佳的组织细胞形态，并具有支持填充、减少皱褶和断裂的作用，能切出2-3微米的超薄切片。这个您可以放心。”

“温度过低、过高会导致组织块过硬或者硬度不够，从而影响切片质量，产生搓板状、梯田状、厚薄不均、破碎及粉末状现象。根据不同组织的形态和组成成分的不同，未固定的组织合适的对应温度大致如下：乳腺、卵巢、子宫等：-20 ~-25 ；胃肠等：-18~-20 ；甲状腺、肝、肾、脾等：-15 左右；脂肪组织一般在-35 以下。固定好的组织合适的温度一般为-12~-17 。”

“切片时会提前将锋利的刀片调节合适的角度安在刀架上，会保证切片刀在适宜的温度下，以防止切片粘连。用力会均匀、柔和，也会防止污染及切片皱褶，尽量切到组织最大面，为了切到病理部位，必要时可能要连续切片，然后用刷子辅助展开切片，沾在载玻片上。片子沾好后，就立刻将它浸没于固定液中。固定液种类很多，常用的有冰丙酮、多聚甲醛、环保组织固定液等。如果组织固定延迟会出现风干的假象，当组织片粘在有温度的玻片上时就会出现明显的风干假象，表现为核的细节丢失及胞浆液的溢出。我想这一点您也需要了解并做好心理准备。”

看着他们口若悬河胸有成竹的样子，

我顿时充满了信心。

会议结束后

主刀医生递给了我一份手术合同，

我从头到尾看了一遍，

发现合同的末尾明确写了

冰冻切片的常见问题及解决方案：

如下所示：

1 切片的厚度：

一般情况推荐切6um厚，这种厚度使染色更加饱满，层次清晰，6um的片子可以有更多的时间去避免风干假象，也会减少冰晶所造成的细胞核空洞。特殊情况下可能需要更厚或更薄的片子。

2 脱片现象：

脱片一般有以下几种情况：

（1）本身非常干燥或过度脱水的组织；

（2）组织片的周长与面积比过大，像细条形的组织容易受染色缸内液体涡旋应力的影响而脱落，同样包括薄的纤维囊肿及不规则的坏死组织，太厚的组织也不例外；

（3）少数情况需要使用100%的乙醇固定；

（4）一张玻片贴多个片子时，片子周围的包埋物相互重叠；

（5）组织内含过多的坏死组织，组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分溢出，坏死组织失去支撑作用，染色时容易脱落；

（6）固定液浓度过低；

（7）载玻片不干净。

3 冰晶的形成：

含水量特别多的组织冷冻时会出现肥皂泡样的空隙，主要是因为组织中的水分凝固时形成球形的冰晶，挤压纤维组织条而产生泡沫样的形状。组织片在进一步处理时泡沫样的水分又重新分布于间质，而未曾冷冻的组织显示出间质的水肿。这些水分巨多的组织在切片时很难保证不裂开，应尽可能提高切片的温度。

4 冰冻假象：

组织在冰冻时候的变化与水结冰膨胀是密切相关的，细胞实性的组织会受到冰泡膨胀的挤压，这在水肿组织非常明显。有些组织细胞浆内会出现一些空泡，也是冰冻假象的一种。

如此周全的考虑

已经完全消除了我的后顾之忧，

于是，

我愉快地签下了自己的名字。

静待重生。

……

手术很成功，

所以，

我又可以在这里和你们说话了。