森贝伽生物：HP-1细胞培养建议

一、细胞概述

THP-1细胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系。它来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。

THP-1 细胞的特点

喜欢酸性环境

在偏酸性环境中，THP-1生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可。

有密度依赖性

THP-1细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在50万-100万细胞/毫升为宜；超过200万/毫升则需要传代。

二、细胞培养条件

三、细胞培养建议

1、细胞复苏：将冻存管从液氮中取出后迅速放入37 水浴锅中摇晃解冻，准备15ml离心管，将完全培养基移取6ml与细胞混合均匀，在1000RPM条件下离心3min，弃去上清液，再加入6ml完全培养基吹匀后重复离心3min，弃去上清液，补加6ml完全培养基吹匀。然后将细胞悬液加入T25培养瓶放入细胞培养箱（37 ，5%CO2）过夜，第二天检查细胞密度。

2、细胞传代：当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。如果用肉眼观察则将培养瓶平放静置后观察镜下细胞密度达到80%，即可进行传代。

3、细胞冻存：50%RPMI-1640+40%FBS+10%DMSO 配置细胞冻存液或使用Biochannel细胞冻存液（，将培养瓶中细胞悬液抽出，在1000RPM条件下离心3min，弃去上清液。按照需求将配置好的细胞冻存液加入离心管中吹匀细胞，再分装冻存管中置于程序降温盒中在-80 冰箱中过夜，次日放入液氮中保存。

四、BioChannel 血清培养效果

五、THP-1培养常见问题及解决方案

Q: 培养过程中细胞发生贴壁怎么办？

A: 少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。

Q: 培养过程中细胞发生聚团怎么办？

A: 少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。

Q: 培养基里一定要加β-巯基乙醇吗？

A: β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

Q: 镜下观察时，难以聚焦或估算密度怎么办？

A: 悬浮细胞会随着液体流动，不容易聚焦，静置5-10分钟使细胞沉底，之后再轻轻放上显微镜观察，将有助于聚焦和估算细胞密度。