RCA滚环扩增技术原理简介

滚环扩增是新近发展起来的一种恒温核酸扩增方法。以环状DNA为模板，通过一个短的DNA引物（与部分环状模板互补），在酶催化下将dNTPs转变成单链DNA，此单链DNA包含成百上千个重复的模板互补片段。

滚环扩增和常见的PCR扩增技术相比，最大的不同是前者都是以同一个模板DNA进行扩增，不会引入扩增错误，其准确性会明显提高。

RCA生化反应体系中一般都用Phi29酶及配套的buffer.Phi29酶具有链置换功能，在DNA聚合过程中以原始的DNA环为模板不停地进行滚环扩增，扩增片断可以高达70000nt。

最开始的RCA用于扩增大小为100nt左右的DNA环，且1小时内只能扩增20个拷贝，限制了其应用。现在可以采用多重引物RCA方法，采用随机引物进行随机滚环扩增，从而实现10000个拷贝的复制。具体原理如下图所示。

Multiply-primed RCA

反应原理：1）随机扩增引物结合在单链DNA环上；呈多位点结合。2）在Phi29酶的作用下沿着DNA链进行延伸，并到达前一条引物结合位点时将引物解开继续延伸，后续遇到引物同样延伸。3）当引物延伸一圈回到引物结合的起始位置时将引物置换掉，合成的片断呈线状，引物延伸继续进行；4）在合成的多条线性DNA上又有引物结合位点，引物结合上去又可以进行延伸，从而进行多引物的RCA反应。5）原始环上的扩增和新合成链上的扩增同时进行从而极大的放大拷贝数，增加反应产物。