40岁以上AMH快速回升，日本研究或可逆转全球高龄生育结局！

（图源网络，未允侵删）

高龄生育一直是世界性难题，我们前段时间讲过血清维生素D水平低的女性，AMH也比较低，所以维生素D可能是改善AMH水平的一个方案。

今天我带大家了解另外一个方案，这个方案是通过一个日本的随机对照试验发现的，这可能是日后最有希望改变高龄女性生育结局的一个超牛方案。

最重要的是该研究已引起了我国研究中心的注意，我国学者去年底在BMJ上公开了中国研究的备案，可能不久的将来，在我国就可以走向临床了。

说了半天到底是什么方案呢，那就是在卵巢功能减退患者的黄体期连续两个周期注射粒细胞集落刺激因子，可快速提升AMH水平，提高试管累积活产率。

01一次意外发现和动物试验

本次研究起源于一次临床试验的意外发现，我们都知道粒细胞集落刺激因子在试管移植前注射可能有助于提高胚胎着床率，目前这也已经应用于临床。

当时用于治疗10名卵巢储备减少的妇女的反复植入失败，虽然短期结果没有改善，但神奇的是10人中有3人在2个月后自发怀孕。

更令人惊喜的是，其中一次怀孕涉及一名45岁妇女的双胞胎，这期间并没有诱导排卵的治疗。

另外，动物试验也有了新的发现。

在糖尿病大鼠中，使用粒细胞集落刺激因子后，发现了持续降低卵巢滤泡退化以及卵巢基质的退化和纤维化现象，同时增加血清抗穆勒激素（AMH）浓度。

另外，在顺铂诱导（化疗药物）卵巢储备减少的大鼠中，粒细胞刺激因子给药也显著增加卵巢窦卵泡和血清AMH。

基于上述的研究事实，日本学者认为粒细胞集落刺激因子在试管周期之前2个周期的黄体早期阶段给药，可以改善卵巢储备不良患者的胚胎发育和怀孕率。

同时也认为粒细胞刺激因子的使用可能提高了AMH的浓度，从而改善了卵子的质量。

所以，粒细胞集落刺激因子的临床随机对照试验就此启动，希望通过这个试验来验证研究者的猜测。

02双盲随机对照试验超高权威度

不是科研人员可能很多姐妹不了解什么是双盲随机对照试验，这是科研里规格最高的一种试验方式。

研究者和招募的患者都是双盲的，患者的分组是依赖电脑随机抽取或通过信封抽取的，彻底杜绝了人为操作的主观性。

这个试验是在Jinno生殖诊所进行的，患者都是在这个诊所进行试管治疗的女性，465名患者中有111名患者符合试验要求，11人拒绝参与，留下100人被纳入研究。

这100名患者随机化分组是从一个装在密封信封中的小组分配的盒子中抽取，混合1:1。

为了更清楚地检测粒细胞集落刺激因子诱导的卵巢功能改善，这次试验入选的标准是轻度和中度卵巢储备不良的患者，剔除了卵巢功能严重衰退的患者。

之前研究发现，93%的四十多岁的不育女性的AMH数值低于2纳克/毫升。

早些时候的一项研究发现，1.9纳克/毫升是38岁日本女性血清AMH浓度的中位数，该人群的生育率即将急剧下降。

所以，本次随机对照试验患者的纳入标准是年龄在20至42岁之间；不超过一次促排；血清AMH浓度低于2纳克/毫升；第3天血清FSH浓度低于30IU/升；没有严重过敏性疾病、严重肝病、肾病或心脏病或子宫不孕症的病史；以及没有无精子症的男性伴侣。

所有登记的患者最初在连续2个周期内接受常规不孕不育治疗（她们没有输卵管堵塞，是有自然怀孕机会的）。

在这两个周期中，试验组在黄体早期接受了G-CSF的皮下给药。

对照组没有接受安慰剂，她们在两个周期治疗仍然没有怀孕的，会安排进入试管周期。

03双盲随机对照试验的结果如何？

看了上面的试验安排，我想大家一定很期待试验结果，100名患者被登记并随机归入G-CSF或对照组（每组50名患者）。

所有G-CSF患者都完成了研究，1名对照组因不明原因退出，留下49名。没有观察到G-CSF的不利影响。

G-CSF和对照组在两个周期中都接受了常规不孕治疗，3名患者在第一次G-CSF启动后次月自发排卵怀孕。

所以，研究对象变更为47名G-CSF和49名对照组患者接受了卵巢刺激，但一个对照组没有诱导卵泡生长，2名G-CSF患者和4名对照组没有获得可转移的胚胎。

所以最终的研究对象变为45名G-CSF患者和44名对照组患者。

G-CSF和对照组分别实现了14次和6次临床怀孕，12次和5次持续怀孕，以及9次和5次活产分娩。

G-CSF组的临床妊娠率（30%和26%）和持续怀孕率明显高于对照组（12%和10%）

另外，G-CSF和对照组之间的可移植胚胎数量没有显著差异，与对照组相比，明显更多的G-CSF患者实现了更多囊胚的冷冻保存。

随后，在G-CSF和对照组中进行了21和14个冷冻复苏周期，导致6和4次临床怀孕，4次和2次活产。

每个冷冻周期的临床怀孕率在G-CSF和对照组之间相似（29%和29%）。

总结下来，G-CSF组每名患者的累计活产率为32%，明显高于对照组的14%。G-CSF和对照组之间所有临床怀孕的流产率相似（30%和30%）。

通过逻辑回归分析分析了4个主要生育相关因素（年龄、第3天FSH、AMH和G-CSF启动）与实际活产关联，只有年龄和G-CSF启动与累积活产显著相关。

在hCG给药当天，47名G-CSF患者的卵泡数量大于16毫米和血清E2浓度往往高于48名对照组，虽然没有达到统计学意义，但有差异。

比较47名G-CSF和48名成功取卵的对照患者，取卵数量没有显著差异，但受精卵母细胞数量和第2天胚胎数量明显高于对照组。

在取卵后5天内，G-CSF患者的卵母细胞比对照患者的卵母细胞更适合囊胚培养（57%对29%）。

在G-CSF组中，每次取卵获得的囊胚的数量和囊胚获取率明显高于对照组（53%对27%），因此，与对照组相比，实现多余囊胚冷冻保存的G-CSF患者明显多。

在G-CSF组中，卵母细胞发育成受精卵母细胞或第2天胚胎的发生率明显高于对照组，G-CSF组的新鲜胚胎的植入率也明显更高（21%对9.5%）。

这提示G-CSF组的卵母细胞和胚胎的发育潜力明显更大。

G-CSF给药后，血清AMH浓度显著增加，但在对照组的同一间隔内显著下降，因此，G-CSF组的血清AMH浓度明显高于对照组。

总之，这个研究告诉我们，在连续两个周期黄体期G-CSF给药后，患者的AMH得到了部分恢复，取卵更多，配成的胚胎更多，养成的囊胚更多。

同时，还导致了三个患者的自发排卵怀孕，更多的患者临床妊娠和累积活产。

这说明，G-CSF似乎在质量而不只是在数量方面改善了窦卵泡生长，这种机制与之前的G-CSF植入改善机制明显不同。

04这个研究带给我们的思考

我们之前熟悉G-CSF，主要是用于胚胎移植前，会增加反复植入失败或子宫内膜变薄的患者的植入率和临床妊娠。

在植入窗口内开始给药时，G-CSF还降低了无法解释的反复流产妇女的流产率，并增加了活产率。

另外，宫内给药G-CSF会增加子宫内膜薄的妇女的子宫内膜厚度，会通过免疫相互作用和子宫内膜生长促进来改善子宫内膜接受能力。

以上这些作用，我们都认为它的改善作用是迅速发生的，是没有周期的。

但是，这项研究发现，G-CSF可能并不会迅速发挥作用，G-CSF启动在随后的周期中对胚胎发育和怀孕率表现出延迟影响。

这个随机对照试验显示，G-CSF组血清AMH的显著增加和卵泡发育的改善，这表明窦卵泡生长增强是潜在机制。

也就是说，G-CSF对于窦卵泡期的卵子质量提升有明显的作用，后期卵子质量和胚胎质量的提升都有赖于前期药物的刺激。

在上一个动物试验中，在接受化疗药的雌性大鼠中，G-CSF还增加了原发性、继发性和三级卵泡的数量，这也从侧面证明了这一点。

G-CSF给药抵消了凋亡、炎症状态、血管受损、生长衰竭和氧化应激。

这种生理状态的恢复可能表明，对于我们卵巢储备不良的患者，可能更适用于增强窦卵泡生长的机制。

G-CSF还促进骨髓干细胞进入外周血，可能有助于组织再生，自体干细胞在5天后的卵巢组织中被发现。

干细胞有减缓卵巢衰退，从而可以提升卵泡和卵母细胞数量，有利于妊娠。

据报道，向人类卵巢注射富含血小板的血浆（PRP）也可以改善卵巢储备标志物和临床怀孕率，达到和这个试验类似的效果。

然而，带有超声指导的卵巢PRP注射需要镇静，而皮下G-CSF的侵入性较小、更安全、更容易，特别是对于重复治疗。

此外，这次试验没有发现药物对胎儿和孕妇有任何不良影响，所有接受G-CSF的受试者所生的婴儿都没有先天性异常，体重与对照组所生的婴儿相似。

05国内可以做这个治疗吗？

很多研究看上去效果很不错，但是姐妹们问起来，很多都在国内无法办到，但这次研究是个例外。

我国这个研究已经立项，并且公开发表在了去年年底的BMJ上。

这个研究是由兰州大学第二医院生殖医学中心王芳教授领衔的。

合作的医院主要有兰州大学第二医院生殖医学中心、青海省人民医院生殖中心、河北生殖健康医院、青海红十字医院。

这项临床、多中心、三盲、安慰剂对照试验将采用平衡随机化方式，计划样本量为312名参与者（每组156名受试者）。

所以，如果有这方面意向的姐妹，可以联系一下上面的医院和医生，也许会改变你求子的方向哦，当然事先声明，这绝对不是广告。

我只是觉得这个方向可能会比较有前途，也许会改变高龄求子姐妹的未来，也许将来高龄生育将不会再如此艰难。

总之，看到这些研究我很兴奋，今天越写越难以抑制自己高兴的心情，虽然上面的研究样本数量不多，但质量却非常高，而且试验结果非常惊喜。

非常期待国内的研究，希望这给高龄姐妹带来真正的益处，G—CSF价格不高，无论是从经济角度还是从收益角度，这无疑是高龄生育圈的一件大好事。

希望我国试验早点成功，这个方案早点投入临床，加油加油加油！

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参考文献

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