人参中的水溶性蛋白含量测试论文范本

　　1 仪器与材料

　　DS-1型高速组织捣碎机（上海标本模型厂）；高速离心机Minispin（德国Eppendorf公司）；CP225D型电子天平（十万分之一，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；透析带（XH420，截留分子量：6000-8000）；LL3000 型冷冻干燥机（德国Heto公司）；Multiskan MK3型酶标仪（Thermo公司）；DYY-8C型电泳仪（北京六一仪器厂）；JD801凝胶电泳图像分析系统（江苏省捷达科技发展有限公司）；

　　Tris（Sigma公司）；硫酸铵（Sigma公司）；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白（分子量依次为：97.0 kDa，66.2 kDa，43.0 kDa，31.0 kDa，20.1 kDa，14.4 kDa），购自于中科院上海生物化学研究所。其它试剂均为国产分析纯。

　　5年生园参、野山参及西洋参均购自于吉林省靖宇县，经长春中医药大学研发中心姜大成教授鉴定，人参为五加科（Araliaceae）植物Panax ginseng C. A. Meyer的干燥根茎，野生者为野山参。西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根茎，符合《中国药典》（2005版Ⅰ部）的规定。

　　2 方法与结果

　　2.1 园参、野山参、西洋参水溶性蛋白的制备

　　取5年生园参、野山参、西洋参鲜品适量，称重，高速组织捣碎机粉碎，加适量含0.15 mol/L NaCl的pH 7.4 10 mmol/L Tris-HCl缓冲液，4 浸提24h，10 000 r/min离心10min，上清液用80%硫酸铵沉淀，4 静置过夜，沉淀加适量体积的pH7.4 10mmol/L Tris-HCl缓冲液溶解，对蒸馏水过夜透析，-20 预冻，冻干，得三者的水溶性蛋白，收率见表1。由表1可知，野山参及西洋参中水溶性蛋白的含量较园参中的蛋白低很多，西洋参中的水溶性蛋白为园参的50%左右，而野山参中的水溶性蛋白，仅为园参的10%。

　　2.2 SDS-PAGE检测及凝胶图谱分析

　　取上述制备的'蛋白样品各5 mg，用蒸馏水配制成浓度为5 mg/ml的蛋白溶液，经SDS-PAGE检测（分离胶浓度为15%，浓缩胶浓度为5%。浓缩胶电压为70 mV，分离胶电压140 mV。电泳结束后用考马斯亮蓝R250染色，最后用含45%甲醇和10%冰醋酸的水溶液脱色至背景清晰），结果见图1。

　　采用JD801凝胶电泳图像分析系统对电泳结果进行分析，生成各泳道密度曲线图［横轴为泳带的迁移率（Rf），纵轴为泳带的积分光密度值（IOD）］，结果见图2 5，每条泳带对应的分子量、迁移率、积分光密度值及其百分比（每条泳带的积分光密度值占整个泳道所有条带积分光密度值的百分比）见表2 5。

　　由电泳结果可知，园参、野山参和西洋参的水溶性蛋白存在很大的差异，尤其是园参与野山参的差异最大。通过JD801凝胶电泳图像分析系统的分析结果可以看出，三者的蛋白的分子量主要分布在60 000 10 000Da范围内，但在含量上却存在很大的不同。园参蛋白包括分子量为60 229.34Da，38 819.94Da，27 634.28Da，25 151.99Da，21 276.71Da，18 187.72Da，16 467.65Da，10 448.78Da等8种蛋白，含量均比较高，其中分子量为27 634.28Da和25 151.99Da的蛋白的含量最高，其次为分子量60 229.34Da，16 467.65Da的两种蛋白；野山参蛋白包括分子量为60 229.34Da，48 607.40Da，38 617.48Da，28 218.35Da，26 641.09Da，22 536.37Da，14 832.50Da，9 313.36Da等8种蛋白，但含量比较高的蛋白只有两种，分子量分别为60 229.34Da，14 832.50Da，其它几种蛋白的含量较园参均比较低；西洋参蛋白包括分子量为60 229.34Da，41 118.23Da，39 023.45Da，27 634.28Da，21 840.31Da，18 572.13Da，15 466.11Da，10 781.79Da等8种蛋白，其中分子量为27 634.28Da， 60 229.34Da，18 572.13Da 3种蛋白的含量较高，其它几种蛋白的含量较园参也均比较低。